1、Ct (稀释文库) < Ct (DNA Standard 1)，提醒文库稀释度不够，多见于过度扩增的文库。提高文库稀释倍数沉复尝试。 2、Ct (稀释文库) > Ct (DNA Standard 6)，提醒文库稀释度过高或构建失败。通例文库在1/10,000左右的稀释度时得到的Ct不应超过Ct (DNA Standard 6)。削减稀释倍数沉复尝试。
1、移液精确度差。 2、所有试剂在使用前应充分解冻并彻底混匀。 3、文库难于扩增。GC/AT含量过高或长度超过1 kb的文库扩增效能较差，定量颠簸性大。 4、文库降解。文库应现用现稀释，稀释好的文库应置于冰上备用，用完抛弃。
1、移液精确度差。 2、所有试剂在使用前应充分解冻并彻底混匀。 3、文库难于扩增。GC/AT含量过高或长度超过1 kb的文库扩增效能较差，定量颠簸性大。 4、文库降解。文库应现用现稀释，稀释好的文库应置于冰上备用，用完抛弃。
1、移液精确度差。 2、所有试剂在使用前应充分解冻并彻底混匀。 3、仪器有关问题。确认所用ROX Reference Dye与定量仪器匹配。
1、Ct (DNA Standard 6) - Ct (DNA Standard 5) < 3.1，提醒反映系统有传染。应凭据NTC阴性对照的融解曲线确认传染源(文库传染或DNA Standards传染) 。 2、Ct (DNA Standard 2) - Ct (DNA Standard 1) < 3.1，提醒基线(Baseline)设置不当。手动调整基线(Baseline)为1-3。 3、DNA Standards之间的ΔCt > 3.6，提醒扩增效能差。确认所有试剂在使用前都已充分解冻并彻底混匀 ；确认所有组分浓度正确以及反映法式无误 ；确认每三个复孔的数据Ct≤0.2，不然去掉。 4、长功夫强光照射会导致2×SYBR qPCR Master Mix荧光值降落，进而造成ΔCt > 3.6。应依照推荐方式避光贮存试剂。
1、受传染影响的尺度品的Ct值未舍弃。 2、所有试剂在使用前应充分解冻并彻底混匀。 3、仪器有关问题。确认所用ROX Reference Dye与定量仪器匹配。 4、移液精确度差。
1、如Ct (NTC) - Ct (DNA Standard 6) < 3或者Ct (DNA Standard 6) - Ct (DNA Standard 5) < 3.1，且推算扩增效能超过100%，提醒反映系统有传染。应凭据NTC阴性对照的融解曲线确认传染源(文库传染或DNA Standards传染) ；嬖斐叨惹呤，应先凭据Ct (NTC)确定尺度曲线有效Ct值领域，舍弃受传染影响的Ct，使用渣滓的Ct 绘造。 2、不适当的基线(Baseline)设置会增大Ct (DNA Standard 1)，进而影响扩增效能推算。手动调整基线(Baseline)为1-3循环。 3、移液精确度差。
1、不适当的基线(Baseline)设置会增大Ct (DNA Standard 1)。手动调整基线(Baseline)为1-3循环。 2、仪器有关问题。确认所用ROX Reference Dye与定量仪器匹配。
可能原因： 1、若样本必要稀释检测的比例很大，例如1:100，建议客户先1:10再1:10稀释。切勿直接在1μl的样本参与到99μl的试剂稀释液中。 2、将液体参与到孔中时每次的操作手法要一致。
来自于正常个别的血清或血浆建议依照说明书提醒稀释，若有非正常个别样本，为了了局的有效性以及降低尝试风险水平建议客户做预尝试决定样本的稀释倍数。
